PCR: Polymerase Chain Reaction, yang menggunakan DNA untuk melepas (denaturasi) in vitro pada 95 ° C. Pada 55 ° C, primer dan untai tunggal digabungkan (annealing) sesuai dengan prinsip pasangan basa komplementer, dan kemudian suhunya disesuaikan hingga Sekitar 72°C, DNA polimerase mensintesis untai komplementer (memperpanjang) sepanjang arah dari asam fosfat ke lima gula karbon (5'-3').
Instrumen PCR sebenarnya merupakan alat pengatur suhu, yang dapat melakukan pengontrolan suhu dengan baik antara 95 °C, 55 °C, dan 72 °C.
Menurut tujuan amplifikasi DNA dan standar deteksi, instrumen PCR dapat dibagi menjadi: instrumen PCR biasa, instrumen PCR gradien, PCR in-situ, instrumen PCR kuantitatif fluoresen waktu nyata, dll.
Mesin PCR biasa
Umumnya, mesin PCR yang hanya dapat menjalankan suhu annealing tertentu untuk amplifikasi PCR disebut mesin PCR biasa, yang juga merupakan mesin PCR tradisional. Jika Anda ingin menggunakannya untuk suhu anil yang berbeda, Anda harus menjalankannya beberapa kali.
Mesin PCR biasa terutama digunakan dalam penelitian ilmiah, pengajaran, kedokteran klinis, inspeksi, karantina, dll.
Instrumen PCR gradien
Amplifikasi PCR satu kali dapat mengatur serangkaian kondisi suhu anil yang berbeda (biasanya 12 gradien suhu) yang disebut instrumen PCR gradien. Fragmen DNA yang berbeda memiliki suhu annealing optimal yang berbeda.Dengan menetapkan serangkaian suhu gradient annealing untuk amplifikasi, amplifikasi PCR satu kali dapat menyaring suhu anil yang paling sesuai dengan tingkat ekspresi tinggi untuk amplifikasi yang efektif.
Instrumen PCR gradien terutama digunakan untuk mempelajari amplifikasi suhu anil DNA yang tidak diketahui, yang menghemat waktu dan biaya. Ini juga dapat digunakan sebagai PCR biasa tanpa mengatur gradien. Instrumen PCR gradien banyak digunakan dalam penelitian ilmiah, lembaga pengajaran, inspeksi, karantina, dll.
Mesin PCR di tempat
PCR adalah mengekstrak DNA dari sel atau jaringan untuk reaksi amplifikasi gen, sedangkan PCR in situ adalah untuk menjaga keutuhan sel atau jaringan, membuat sistem reaksi PCR menembus ke dalam jaringan dan sel, dan melakukan gen pada lokasi DNA target sel Amplifikasi. DNA target tidak hanya dapat dideteksi, tetapi juga jenis sel tempat DNA target berada, yang lebih kondusif untuk mengeksplorasi hubungan antara DNA target dan sel.
Instrumen PCR in-situ terutama digunakan untuk: (1) Mendeteksi fragmen gen eksogen, meningkatkan tingkat deteksi, berfokus pada pemeriksaan infeksi virus, seperti HIV, HPV, HBV, CMV, dll.; (2) Mengamati distribusi patogen dalam tubuh Hukum (3) Fragmen gen endogen, seperti penyakit monogenik manusia, gen rekombinan, kromosom translokasi, fragmen mRNA Ig, fragmen onkogen, dll. (4) Deteksi gen introduksi (5) Deteksi penyakit genetik seperti -thalassemia.
Instrumen PCR kuantitatif fluoresen waktu nyata
Sistem akuisisi sinyal fluoresen dan analisis komputer dan sistem pemrosesan ditambahkan berdasarkan desain instrumen PCR biasa untuk membentuk instrumen PCR dengan fungsi kuantitatif fluoresensi. Prinsip amplifikasi PCR sama dengan amplifikasi PCR biasa, primer yang ditambahkan selama amplifikasi PCR diberi label dengan isotop, fluorescein, dll. amplifikasi. Hasil yang diperkuat terhubung ke analisis komputer dan sistem pemrosesan melalui sinyal akuisisi real-time dari sistem akuisisi sinyal fluoresensi, dan output hasil real-time terukur diperoleh.
Mesin PCR kuantitatif fluoresensi dibagi menjadi saluran tunggal, saluran ganda dan multi saluran. Bila hanya satu probe fluoresen yang digunakan untuk pelabelan, gunakan satu saluran; bila ada beberapa label fluoresen, gunakan beberapa saluran. Saluran tunggal juga dapat mendeteksi penanda multi-fluoresensi dan produk ekspresi gen target, karena hanya satu jumlah amplifikasi gen target yang dapat dideteksi pada satu waktu, dan beberapa amplifikasi diperlukan untuk mendeteksi jumlah fragmen gen target yang berbeda. Multi-saluran kondusif untuk multipleks PCR dan menyadari fungsi mendeteksi beberapa gen target pada satu waktu.
Instrumen PCR kuantitatif fluoresensi terutama digunakan dalam pengujian medis klinis, penelitian dan pengembangan biomedis, industri makanan, lembaga penelitian ilmiah, dll. Teknologi deteksi kuantitatif fluoresensi memiliki banyak aspek diagnosis klinis, terutama berfokus pada diagnosis klinis penyakit yang disebabkan oleh berbagai patogen, seperti penyakit hepatitis, penyakit kelamin, penyakit yang berkaitan dengan perawatan prenatal dan postnatal, dan tuberkulosis.
